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常用注册送28元现金筹码质浓度测定三种方法

测定注册送28元现金筹码质浓度的方法有很多,科研工作者广泛使用的方法比如紫外吸收法,双缩脲法,BCA方法,Lowry法,考马斯亮蓝法,凯氏定氮法等等 ,今天小编以UV法,BCA法,考马斯亮蓝法,其中的三种方法的测定注册送28元现金筹码质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项做详细介绍。

UV法

这种方法是在280nm波长,直接测试注册送28元现金筹码。选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。注册送28元现金筹码质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试注册送28元现金筹码 质。从而显得结果很不稳定。注册送28元现金筹码质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的注册送28元现金筹码质。紫外直接定量法相对于比色法来说,速度快,操作简单;但是容易受 到平行物质的干扰,如DNA的干扰;另外敏感度低,要求注册送28元现金筹码的浓度较高。

 

(1)简易经验公式

注册送28元现金筹码质浓度(mg/ml) = [1.45*OD280-0.74*OD260 ] * Dilution factor

 

(2)精确计算

通过计算OD280/OD260的比值,然后查表得到校正因子F,再通过如下公式计算最终结果:

注册送28元现金筹码质浓度(mg/ml) = F *(1/d) *OD 280 * D

其中d为测定OD值比色杯的厚度

D为溶液的稀释倍数

 

BCA法

原理

BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即 BCA 工作试剂。在碱性条件下,BCA 与注册送28元现金筹码质结合时,注册送28元现金筹码质将 Cu2+ 还原为 Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与注册送28元现金筹码质浓度成正比。BioVision的BCA注册送28元现金筹码检测试剂盒提供了一种简单快速并且耐去污剂(大于5%)的手段检测溶液中注册送28元现金筹码质浓度.

 

成分

试剂 A 100 mL
试剂 B 2 mL
标准注册送28元现金筹码(BSA) 1 mL×2,1 mg/mL

 

保存条件

运输温度:室温(标准注册送28元现金筹码 4~8 ℃ 运输)

保存温度:室温(标准注册送28元现金筹码 -20 ℃ 保存)

有效日期:12 个月

 

使用方法

方法一:96 孔板

1. 配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量,按 50 体积试剂 A,1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。

2. 将注册送28元现金筹码标准品按 0 μL,1 μL,2 μL,4 μL,6 μL,8 μL,10 μL 加入 96 孔板的注册送28元现金筹码标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。

3. 向待测样品孔和注册送28元现金筹码标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20),混匀。

4. 37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。

5. 酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。

6. 制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。

 

方法二:试管法

1. 配制工作液:根据标准品和样品数量,按 50 体积试剂 A,1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液,充分混匀。工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做 2~3 个平行。本处列举的比色体系所用的是 0.5 mL 的比色杯。如比色杯规格不同,体系需要放大到实验将采用的比色杯准确读数所需要的体积。

2. BSA 标准品和样品的准备:样品用水或其它不干扰显色反应的缓冲液配制,使待测定的浓度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备 3 个平行测定。标准曲线一般 5~6 个点即可。根据样品的估测浓度确定各点的具体浓度。稀释 BSA 时可以用水或与样品一致的溶液。如待测样品的浓度约为 200 μg/mL,可按下表的次序加入 BSA 标准品、样品及 BCA 工作液。

3. 取适量体积的标准注册送28元现金筹码,以注册送28元现金筹码液:工作液=1:20 的比例混匀。37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。

4. 将样品与标准品在 562 nm 波长下测定吸光度。

 

考马斯亮蓝法

实验原理

考马斯亮蓝 (Coomassie Brilliant Blue) 法测定注册送28元现金筹码质浓度,是利用注册送28元现金筹码质―染料结合的原理,定量测定微量注册送28元现金筹码浓度快速、灵敏的方法。这种注册送28元现金筹码质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。目前,这一方法是也灵敏度最高的注册送28元现金筹码质测定法之一。

考马斯亮蓝 G-250 染料,在酸性溶液中与注册送28元现金筹码质结合,使染料的最大吸收峰 (lmax) 的位置,由 465 nm 变为 595 nm,溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定 595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合注册送28元现金筹码质的量。研究发现,染料主要是与注册送28元现金筹码质中的碱性氨基酸 (特别是精氨酸) 和芳香族氨基酸残基相结合。
 

突出优点

(1)灵敏度高,据估计比 Lowry 法约高四倍,其最低注册送28元现金筹码质检测量可达 1 mg。这是因为注册送28元现金筹码质与染料结合后产生的颜色变化很大,注册送28元现金筹码质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随注册送28元现金筹码质浓度的变化比 Lowry 法要大的多。

(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要 5 分钟左右。由于染料与注册送28元现金筹码质结合的过程,大约只要 2 分钟即可完成,其颜色可以在 1 小时内保持稳定,且在 5 分钟至 20 分钟之间,颜色的稳定性最好。因而完全不用像 Lowry 法那样费时和需要严格地控制时间。

(3)干扰物质少。如干扰 Lowry 法的 K+、Na+、Mg2+ 离子、Tris 缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA 等均不干扰此测定法。


缺点

(1)由于各种注册送28元现金筹码质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此考马斯亮蓝染色法用于不同注册送28元现金筹码质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用 g-球注册送28元现金筹码为标准注册送28元现金筹码质,以减少这方面的偏差。

(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠 (SDS) 等。

 

试剂与器材

1、试剂

考马斯亮蓝试剂:

考马斯亮蓝 G-250 100 mg 溶于 50 mL 95% 乙醇中,加入 100 mL 85% 磷酸,用蒸馏水稀释至 1000 mL。


2、标准和待测注册送28元现金筹码质溶液

(1)标准注册送28元现金筹码质溶液

结晶牛血清注册送28元现金筹码,预先经微量凯氏定氮法测定注册送28元现金筹码氮含量,根据其纯度用 0.15 mol/L NaCl 配制成 1 mg/mL 注册送28元现金筹码溶液。

(2)待测注册送28元现金筹码质溶液。

人血清,使用前用 0.15 mol/L NaCl 稀释 200 倍。


3、器材

试管 1.5×15 cm(×6),试管架,移液管管 0.5 mL(×2);1 mL(×2);5 mL(×1);恒温水浴;分光光度计。

 

操作方法

一、制作标准曲线

取 7 支试管,按下表平行操作。

摇匀,1 h 内以 0 号管为空白对照,在 595 nm 处比色。

绘制标准曲线:以 A595 nm 为纵坐标,标准注册送28元现金筹码含量为横坐标,在坐标纸上绘制标准曲线。

 

二、未知样品注册送28元现金筹码质浓度测定

测定方法同上,取合适的未知样品体积,使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的 A595 nm 值,在标准曲线上查出其相当于标准注册送28元现金筹码的量,从而计算出未知样品的注册送28元现金筹码质浓度(mg/mL)。

 

注意事项

(1)在试剂加入后的 5-20 min 内测定光吸收,因为在这段时间内颜色是最稳定的。

(2)测定中,注册送28元现金筹码-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

(3)利用考马斯亮蓝法分析注册送28元现金筹码必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作注册送28元现金筹码标准曲线的时候,注册送28元现金筹码标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止误差。

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