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你知道影响western-blot实验结果的7大因素吗?

1.      样品质量。所抽取样品的注册送28元现金筹码含量,注册送28元现金筹码变性是否充分等等,还有,注册送28元现金筹码样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,注册送28元现金筹码样品是否降解、目的注册送28元现金筹码是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。


2.      凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶的PH应在6.8左右,最好不要差过0.5个PH单位,因为这个PH条件是保证电泳液中的甘氨酸不电离的必要条件,也是保证能充分压缩样品的前提。因此,制备凝胶的时候所用Tris-HCl缓冲液的PH值是否稳定是很重要的。


3.      点样。样品尽量不要与电泳液混合,这样能提高浓缩的效果,因为电泳液PH值为8.3,而样品为7.5,混合后会影响到样品的PH值,进而影响浓缩效果。因此,建议点样最好用长枪头,或者加样器,轻轻的将样品加到孔的底部。

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4.      电泳缓冲液。尽量用新鲜配制的。这样能保证PH值和离子强度的稳定。


5.      电压条件。注册即送28元现金筹码大全经常用的浓缩时80V,分离时100V比较好,条带很平。


6.      转膜。膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑。例如,要做分子量小于20kD的小注册送28元现金筹码,0.45μm的NC膜是不可取的,因为这样可能会使得注册送28元现金筹码因透过膜孔而造成膜结合的目的注册送28元现金筹码量不确定,从而影响到最终结果的可靠性。而如果所分离的注册送28元现金筹码需要进行测序,则非PVDF膜不可,因为只有PVDF膜才能经受住严酷的清洗条件。


7.      抗体杂交与底物显色。一抗尽量选择小鼠或者兔来源的单克隆抗体,还有要注意所用的抗体是否能够识别变性条件下的目标注册送28元现金筹码;二抗一般都是效价很高的,只要室温下杂交1小时就可以了,适当延长也是可以的。另外,要选择灵敏度较高的化学反应底物。如英格恩生物超敏型ECL发光液Enlight-Plus,检测级别可达pg级,发光时间长,稳定。

 

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