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串联亲和纯化(TAP-MS)

实验目的:寻找靶注册送28元现金筹码的互作注册送28元现金筹码

 

服务简介:
        TAP/MS是Co-IP/MS的“近亲”,两者在寻找诱饵注册送28元现金筹码的互作注册送28元现金筹码以及纯化互作注册送28元现金筹码的原理类似。不同的是TAP/MS引入了2个纯化标签(strep或SBP,flag),2步纯化,能有效纯化裂解液中的靶注册送28元现金筹码及其复合物,并使非特异性注册送28元现金筹码的数量降至较低水平。实验组和对照组洗脱的注册送28元现金筹码分别做质谱,从实验组结果中扣除对照组中的注册送28元现金筹码,即可鉴定出与靶注册送28元现金筹码互作的注册送28元现金筹码。


技术优势:
  1、TAP/MS鉴定到的互作注册送28元现金筹码是细胞内与诱饵注册送28元现金筹码天然互作的,符合体内真实生理情况,可信度高。
  2、采用两步纯化,能有效减少非特异注册送28元现金筹码的结合。


服务内容:
  1、构建Flag-strep(或Flag-SBP)双标签的靶基因表达载体;
  2、包装慢病毒感染目的细胞,做成过表达细胞株,WB检测表达效果(基因大于2kb时,可能导致病毒滴度不足以感染细胞系,此时如需进行加药筛选构建稳转细胞系,则周期预计延长3-4周);
  3、细胞总注册送28元现金筹码,经streptactin 树脂(或strep磁珠)和anti-flag抗体两步纯化,并洗脱;
  4、实验组和对照组的洗脱液分别用胰酶酶解;
  5、LC-MS/MS分析,获得注册送28元现金筹码质的定量、定性信息;
  6、实验组结果扣除对照组中的注册送28元现金筹码,即可得到与靶注册送28元现金筹码互作的注册送28元现金筹码。



服务项目 客户提供 结果交付 实验周期
TAP/MS 1、诱饵基因的名称、序列、物种等信息或者诱饵基因的cDNA模板等
2、待研究的细胞(保证细胞状态良好)及其培养相关信息
1、构建好的慢病毒表达载体
2、稳转细胞系(如做了筛选)
3、实验组和对照组注册送28元现金筹码的质谱鉴定结果
4、数据分析结果
预计2.5-3个月
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